Исследование культуральных, морфологическихи физиолого-биохимических особенностей Lactobacillus acidophilus 317/402 «Narine»

Печать

Рейтинг:  0 / 5

Звезда не активнаЗвезда не активнаЗвезда не активнаЗвезда не активнаЗвезда не активна
 

L. acidophilus 317/402 культивировали в стерильном обезжиренном молоке. В зависимости от температуры сквашивания и количества вносимой закваски время свертывания молока колеблется в пределах 3-8 часов. Свертывание молока начинается со дна сосуда. При высокой температуре сквашивания молока сгусток получается плотный, немного грубоватый и почти не вязкой консистенции, относительно кислый, с приятным молочнокислым характерным вкусом и ароматом. При относительно низкой температуре сквашивания сгусток плотновато-нежный, ровный, без выделения пузырьков газа, однородный, сметанообразный, без выделения сыворотки, сильно вязкой (тягучей) консистенции.

Жидкую бактериальную закваску в разведении 103 высевали на твердую питательную среду. На поверхности плотных питательных сред L. acidophilus образует крупные колонии. Цвет колоний белый, непрозрачный; профиль – выпуклый. Структура колонии крупнозернистая.

При микроскопировании L. acidophilus в виде тонких неподвижных палочек располагается по одиночке или в цепях по 3-5 клеток. В клетках иногда видны темные пятна, похожие на споры или на включения. Окраска по методу Пешкова показала отсутствие спор у L. acidophilus 317/402. Окраска микроорганизмов по Омелянскому показала наличие в клетках запасного питательного вещества волютина. Известно, что волютин является формой запасного азота и фосфора в клетке и расходуются при голодании бактериями [1].

L. acidophilus относится к грамположительным бактериям. Величина клеток составляет 8,22×0,71мкм. В 1 мл жидкой бактериальной закваски содержится 1млн. клеток.

Молочнокислые бактерии характеризуются неодинаковой способностью использовать различные углеводы, что используется для идентификации микроорганизмов Bergy и другими авторами [2]. Показателем интенсивности роста является то, какие углеводы используют микроорганизмы и какими изменениями среды сопровождается их рост (табл.).

Проведенные исследования показали, что L. acidophilus на средах, содержащих Д-мальтозу, Д-фруктозу, Д-лактозу, Д-глюкозу и галактозу, как в аэробных, так и в анаэробных условиях вызывало помутнение среды, но осадка не образовывалось. Пленка образовалась на поверхности тех сред, которые содержали Д-мальтозу, Д-фруктозу, Д-лактозу и галактозу только в аэробных условиях. Пузырьки газа наблюдались в анаэробных условиях на средах, в состав которых входили Д-фруктоза, Д-лактоза, Д-глюкоза и галактоза.

В средах, содержащих сбраживаемые углеводы (Д-мальтозу, Д-фруктозу, Д-лактозу, Д-глюкозу и галактозу) происходило подкисление среды, как в аэробных, так и в анаэробных условиях. Начальная кислотность среды была 500Т, а конечная, в среде, содержащей Д-мальтозу составила в аэробных условиях 1800Т, а в анаэробных условиях - 3100Т; в среде, содержащей Д-фруктозу - 1700Т в аэробных условиях и 3200Т - в анаэробных условиях; в среде, содержащей Д-лактозу в аэробных условиях кислотность составила 2500Т, в анаэробных условиях - 3800Т; в среде с Д-глюкозой кислотность составила 4500Т, а в анаэробных условиях - 6300Т; в среде, в состав которой входила галактоза, кислотность в аэробных условиях была 2200Т, а в анаэробных условиях - 3700Т. Эти результаты объясняются тем, что углеводы подвергаются процессу брожения, в результате которого образуется, главным образом, молочная кислота (L.acidophilus имеет гомоферментативный тип брожения [3]), за счет которой происходило снижение кислотности. Кислотность в анаэробных условиях была в 0,14- 1,8 раза выше, чем в аэробных.

В средах, содержащих углеводы не сбраживаемые L. acidophilus (L-арабиноза, Д-манит, L-рамноза, эксилоза) не происходило помутнение среды, не образовывался ни осадок ни пленка, газ не выделялся, но происходило подщелачивание среды, т.к. происходила нейтрализация кислой среды продуктами разложения пептона [1].

Таблица

ПОКАЗАНИЯ РОСТА L. ACIDOPHILUS ШТАММ 317/402 НА СРЕДЕ, СОДЕРЖАЩЕЙ УГЛЕВОДЫ


Различные углеводы, входящие
в состав питательных сред

Условия культивирования

Признаки роста Lactobacillus acidophilus

Помутнение
среды
Осадок Пленка Газ Начальная
кислотность (0Т)
Конечная
кислотность (0Т)

Д-мальтоза

Аэробные  + - + - 50 180
  Анаэробные + - - - 50 310
Д-фруктоза Аэробные  + - + - 50 170
  Анаэробные + - - + 50 320
Д-лактоза Аэробные  + - + - 50 250
  Анаэробные + - - + 50 380
Д-глюкоза Аэробные  + - - - 50 450
  Анаэробные + - - + 50 630
Галактоза Аэробные + - + - 50 220
  Анаэробные + - - + 50 370
L-арабиноза  Аэробные - - - - 50 Щелочная
  Анаэробные - - - - 50 Щелочная
Д-маннит Аэробные - - - - 50 Щелочная
  Анаэробные - - - - 50 Щелочная
L-рамноза Аэробные - - - - 50 Щелочная
  Анаэробные - - - - 50 Щелочная

L. acidophilus содержит амилазу и расщепляет крахмал, зона гидролиза остается бесцветной.

Протеолитические ферменты (протеазы ) катализируют расщепление белков на фрагменты: поли- и олигопептиды. Никаких изменений в пробирках с культурой L. acidophilus высаженных на мясо - пептонную желатину и молочную агаризованную среду не наблюдалось.

Молоко содержит углеводы (лактозу), белки (казеин), витамины, минеральные соли и поэтому многие микроорганизмы хорошо растут в молоке. Этот рост может быть связан со сбраживанием лактозы, протеолизом казеина или двумя этими процессами одновременно [1].

В результате изучения воздействия на молоко произошло изменение цвета индикатора в 10 пробирках (100%), что свидетельствует об использовании лактозы молока с образованием кислот.

Образование сгустка и отделение сыворотки произошло в 8 пробирках, в процессе использования лактозы образовалась углекислота, что подтверждается использование лактозы молока.

В среде МРС–К исследовалась аэрофильность L. acidophilus. Микроорганизм растет на некотором расстоянии от поверхности, что говорит об микроаэрофильности.


Список литературы

1. Егоров Н.С. Практикум по микробиологии. – М.: Изд-во Московского университета, 1976. –307с.
2. Краткий определитель бактерий Bergey. Под ред. Хоулта, М., Мир, 1980. – 495с.
3. Егоров Н.С. Промышленная микробиология, - М., Высшая школа, 1989.

 

16.10.15
Начальник научно-производственного отдела
ООО "Компания "ГринКо"
Ржевская В.С.